Topmusicanswers
A PCR -ben lévő teljes DNS mennyisége jelentős hatást gyakorol a PCR eljárás eredményére. A túl sok teljes DNS használata tömörített DNS -t eredményez a reakcióedény zárt térében, és hamis alapozáshoz, sőt rossz DNS -szintézishez vezethet a nagy Taq polimeráz molekulák akadályozott diffúziója miatt.
- Mennyi sablont kell hozzáadnom a PCR -hez?
- Túl sok primer gátolhatja a PCR -t?
- Mi okozhatja a PCR reakció sikertelenségét?
- Mennyi DNS elegendő a PCR -hez?
Mennyi sablont kell hozzáadnom a PCR -hez?
Annak ellenére, hogy elméletileg a templát egy molekulája elegendő lenne, lényegesen nagyobb mennyiségű DNS -t használnak általában egy klasszikus PCR -hez, például legfeljebb 1 µg genomiális emlős DNS -t és mindössze 1 pg plazmid DNS -t (1).
Túl sok primer gátolhatja a PCR -t?
A dNTP keverékben lévő szennyeződések hiányos vagy helytelen amplifikációhoz vagy PCR gátláshoz vezethetnek. Használjon kiváló minőségű dNTP-ket. A primerek túlzott koncentrációjának használata növelheti annak esélyét, hogy a primerek nem specifikusan kötődjenek a sablon nem kívánt helyeihez vagy egymáshoz.
Mi okozhatja a PCR reakció sikertelenségét?
Ha a PCR -reakciónak csak egy összetevőjét felejti el, legyen az DNS -polimeráz, primerek vagy akár a templát -DNS, a reakció sikertelen lesz. A legegyszerűbb megoldás a reakció megismétlése. ... Ha ezek után még mindig nincs PCR -termék, akkor valószínű, hogy valami más akadályozza a reakciót.
Mennyi DNS elegendő a PCR -hez?
Egy tipikus 50 µL -es reakcióban 1-2 egység DNS -polimeráz elegendő a cél -DNS amplifikációjához. Szükség lehet azonban az enzimmennyiségek módosítására bonyolult sablonokkal. Például, ha inhibitorok vannak jelen a DNS -mintában, a DNS -polimeráz mennyiségének növelése javíthatja a PCR -hozamokat.
