Topmusicanswers
Ehelyett a PCR feltételeit kell optimalizálni; a PCR -feltételek beállításakor vegye figyelembe a következőket:
- Csökkentse a sablon mennyiségét.
- Növelje a lágyítási hőmérsékletet.
- Használjon touchdown PCR -t.
- Csökkentse a PCR ciklusok számát.
- Tervezze újra az alapozókat.
- Használjon beágyazott primereket.
- Erősítse újra a terméket.
- Miért nem működik a PCR??
- Hogyan optimalizálja a PCR körülményeket??
- Mi okozza a kenetet a PCR -ben?
- Honnan lehet tudni, hogy a PCR fertőzött -e??
Miért nem működik a PCR??
Ha a PCR -reakciónak csak egy összetevőjét felejti el, legyen az DNS -polimeráz, primerek vagy akár a templát -DNS, a reakció sikertelen lesz. A legegyszerűbb megoldás a reakció megismétlése. ... Ha ezek után még mindig nincs PCR -termék, akkor valószínű, hogy valami más akadályozza a reakciót.
Hogyan optimalizálja a PCR körülményeket??
PCR körülmények
- Használjon magasabb denaturációs hőmérsékletet (pl.g., 98 ° C, szemben a 94 ° C vagy 95 ° C -kal) a sablon teljes denaturálása érdekében.
- Tartsa a lehető legrövidebb ideig a GC-ben gazdag sablonok izzítási idejét.
- Használjon magasabb T -értékű primereketm (>68 ° C), mert a hőkezelés magasabb hőmérsékleten is előfordulhat.
Mi okozza a kenetet a PCR -ben?
A DNS -szennyeződés, az RNS a DNS -mintában, a DNS magas koncentrációja a PCR -reakcióban elkenődést okozhat. ... A DNS -elkenődést rendszerint növényekben okozzák a templát DNS magas koncentrációja miatt.
Honnan lehet tudni, hogy a PCR fertőzött -e??
Az oldat szennyeződésének ellenőrzéséhez állítson össze negatív kontrollreakciókat új, ismerten nem szennyezett reagensekkel, és adjon hozzá minden gyanús oldatot az egyes reakciókhoz. Ez a reakció azt mutatja, hogy a szennyeződésre utaló, amplifikált termékek bizonyítják, hogy a hozzáadott oldat szennyezett volt.
