Nincs pcr erősítés

1. Miért nincs amplifikáció a PCR -ben?
2. Miért nem erősödött fel a DNS -em??
3. Mi történik, ha nem adunk hozzá primereket a PCR -hez?
4. Hogyan lehet rögzíteni a nem specifikus erősítést a PCR -ben?

Miért nincs amplifikáció a PCR -ben?

Elégtelen erősítés következhet be, ha a sablon kezdeti mennyisége túl alacsony. Növelje az erősítési ciklusok számát 5 lépésekben, vagy ha lehetséges, növelje a sablon mennyiségét. A dNTP keverékben lévő szennyeződések hiányos vagy helytelen amplifikációhoz vagy PCR gátláshoz vezethetnek. Használjon kiváló minőségű dNTP-ket.

Miért nem erősödött fel a DNS -em??

1) rossz primer tervezés vagy reakció -szabványosítás lehet (Tehát értékelje a primer kialakítását, és végezzen gradiens -PCR -t a különböző hőkezelési tempók értékeléséhez, ahogy mások már mondták); 2) Nincs DNS (előfordulhat, hogy az extrahálási protokoll meghiúsult), és így a primereid csak egymáshoz kötődhetnek (vagy elronthatják őket).

Mi történik, ha nem adunk hozzá primereket a PCR -hez?

Kérdés: Ha elfelejtette hozzáadni a primereket a PCR reakciójához, mi történne és miért? 1. A reakciója kudarcot vall, mert a Taq polimeráz nem tud bázisokat hozzáadni anélkül, hogy már jelen lenne egy kis DNS -darab. ... A reakciója kudarcot vall, mert nincs olyan enzim, amely új nukleotidbázisokat adhatna hozzá.

Hogyan lehet rögzíteni a nem specifikus erősítést a PCR -ben?

Használjon kevesebb ciklust, ha a sablon koncentrációja magas, és használjon több ciklust, ha a sablon koncentrációja alacsony. 2. A hosszabbítási idő túl hosszú volt: A túl hosszú hosszabbítás nem specifikus erősítést tesz lehetővé. Általában 1 perc/kb hosszabbítási időt használjon.